实验结束后应该对操作台面,仪器,实验用具及环境进行清洁,这对污染的控制尤为重要。
1、实验后所有的试剂按照要求进行存放,废料和废液及时清理,避免存放过多和过久,废液缸用有效氯含量为2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染;
2、离心管架、试管架等可重复使用的物品浸泡到500mg/L 的消毒液中过夜,第二天用清水清洗后晾干使用;
3、对各区的生物安全柜、洁净工作台先用75%酒精或者500mg/L 的消毒液擦拭后采用紫外灯进行消毒处理;
4、配制含有效氯500mg/L的消毒液对设备表面、台面、地面、物品表面、传递窗内及门窗进行擦拭,再用纯化水对设备表面、台面、进行擦拭,避免消毒液对实验器具的腐蚀,仪器如核酸提取仪采用内部紫外消毒程序进行照射;
5、操作台面使用移动紫外消毒车近距离辐照1小时,应使灯管距离工作区的距离在60-90cm;实验室内则使用室内紫外灯整晚辐照。
PCR不同区域可合并情况(一)
场景:使用实时荧光PCR仪
依据:关于印发《机构临床基因扩增管理办法》的通知;机构临床基因扩增检验实验室工作导则;卫办医政发〔2010〕194号
合并:扩增区、扩增产物分析区可合并
PCR不同区域可合并情况(二)
场景:采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪
依据:关于印发《机构临床基因扩增管理办法》的通知;机构临床基因扩增检验实验室工作导则;卫办医政发〔2010〕194号
合并:标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。
辅料的质检应结合实际工作中可能用到的场景,并非越苛刻越好,需要每个实验室结合自身情况来设计和调整文中提到的参数。
1.离心管
(1)渗漏密闭性:将n个离心管加入半量墨汁,盖好盖子后放入水中,浸泡30min,没有墨汁渗出为合格。
(2)离心密闭性:将n个离心管加入半量纯水,放入离心机,10000 rpm,30min,管盖未崩开未漏液为合格。
(3)热密闭性:将n个离心管加入半量纯水,盖好盖子称重后放入金属浴中,65℃或90℃(巴氏消毒),30min,再进行称重,离心管未变形,管盖未崩开未漏液,前后重量未变化为合格。
(4)冷密闭性:将n个离心管加入半量纯水,放入-20℃冰箱,24h,离心管未变形,管盖未崩开未漏液为合格。
(5)污染物质检:将n个离心管分别加入半量阴性纯水,盖好盖子涡旋1 min后静置5min,吸取纯水作为模板进行扩增,qPCR无扩增为合格。
(6)抑制物质检:将n个离心管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min,然后进行提取;RNA核酸,DNA核酸,室温静置5min,作为模板进行扩增,qPCR扩增未被抑制为合格。